包被涂層方法：

  注意：在康寧支持網(wǎng)頁(yè)上發(fā)布了具體的應(yīng)用程序*。康寧基底膜基質(zhì)產(chǎn)品的蛋白質(zhì)濃度是批次特異的并提供在分析證明書上。通過(guò)計(jì)算需要的特定蛋白濃度(mg/mL)獲得了稀釋康寧基底膜基質(zhì)產(chǎn)品的一致結(jié)果。為了維持凝膠化的一致性，我們推薦不要將康寧基底膜基質(zhì)稀釋到少于 3 mg/mL。請(qǐng)使用冰冷的無(wú)血清培養(yǎng)基來(lái)稀釋康寧基底膜基質(zhì)。通過(guò)在冰上移液管上下吸液或渦旋小瓶來(lái)混合。

薄層凝膠法
  1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
  2. 將培養(yǎng)板放置在冰上，以 50 μl/cm2向生長(zhǎng)表面加入康寧基底膜基質(zhì)。
  3. 將培養(yǎng)板放置在 37 °C ，30 分鐘。
  4. 如果有必要的話，請(qǐng)?jiān)谑褂脽o(wú)血清培養(yǎng)基輕柔漂洗前吸出未結(jié)合的材料。請(qǐng)確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。

厚層凝膠法
  1.  依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
  2. 將培養(yǎng)板放置在冰上。向康寧基底膜基質(zhì)中加入細(xì)胞并使用預(yù)冷的移液管懸浮。以150-200 μl/cm2向生長(zhǎng)表面加入康寧基底膜基質(zhì)。
  3. 將培養(yǎng)板放置在 37°C，30 分鐘。現(xiàn)在可以添加培養(yǎng)基了。細(xì)胞也可以培養(yǎng)在這一凝膠的頂部。

薄層包被法
  1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
  2. 使用無(wú)血清培養(yǎng)基將康寧基底膜基質(zhì)稀釋到需要的濃度。對(duì)于您的應(yīng)用程序，您應(yīng)該完成以經(jīng)驗(yàn)為主的研究來(lái)確定您的最適包被濃度。
  3. 向被包被的容器中加入稀釋的康寧基底膜基質(zhì)。加入的量應(yīng)該足以容易地覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面。在室溫下培養(yǎng) 1 個(gè)小時(shí)。
  4. 吸出未結(jié)合的材料并使用無(wú)血清培養(yǎng)基輕柔地漂洗。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。

細(xì)胞復(fù)蘇：
  康寧中性蛋白酶(貨號(hào) 354235)，康寧細(xì)胞復(fù)蘇溶液(貨號(hào) 354253)。使用康寧細(xì)胞復(fù)蘇溶液在冰上 7 小時(shí)內(nèi)解聚康寧基底膜基質(zhì)能夠?qū)崿F(xiàn)將生長(zhǎng)在康寧基底膜基質(zhì)上的細(xì)胞最有效地復(fù)蘇，或者使用中性蛋白酶，考慮到連續(xù)培養(yǎng)，中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細(xì)胞。

注意事項(xiàng)
  因?yàn)榭祵幓啄せ|(zhì)在 10°C 以上會(huì)開(kāi)始凝膠化，所以極其重要的是康寧基底膜基質(zhì)和所有的進(jìn)入與康寧基底膜基質(zhì)接觸的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基都應(yīng)該預(yù)冷。產(chǎn)品需要放置于冰上，并在 2oC-6oC 的冰箱中或者冷室中過(guò)夜融化，蛋白濃度高時(shí)可能需要更多時(shí)間。操作康寧 Matrigel matrix時(shí)，我們建議使用預(yù)冷的移液管、吸頭和管子。在實(shí)驗(yàn)的全部過(guò)程中請(qǐng)保持康寧基底膜基質(zhì)處于冰上。

常見(jiàn)問(wèn)題
1.康寧高濃度 Matrigel matrix 用于哪些實(shí)驗(yàn)？
康寧高濃度的 Matrigel matrix matrix 可適用于體內(nèi)應(yīng)用研究，如高濃度蛋白可促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。高蛋白濃度同時(shí)可使康寧 Matrigel matrix 注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的腫瘤細(xì)胞和/或血管生成因子保持原位，便于用于原位分析和/或以后的切除。

2.如何將康寧 Matrigel matrix 用于 3D 培養(yǎng)？怎樣制作 3D 膠？需要將細(xì)胞嵌入到康寧 Matrigel matrix 中嗎？
康寧高濃度的 Matrigel matrix 可適用于體內(nèi)應(yīng)用研究，如制備厚層包被用于 3D 細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞可以嵌在康寧 Matrigel matrix 中或者接種在康寧 Matrigel matrix 表面（覆蓋法）。

3.使用 Corning Matrigel matrix 時(shí)，需要將移液器吸頭和離心管預(yù)冷嗎？
是的。因?yàn)?Corning Matrigel matrix 在高于 10℃的條件下即會(huì)開(kāi)始成膠，我們推薦操作 Matrigel matrix 時(shí)使用預(yù)冷的移液管、吸頭和離心管。

4.Corning Matrigel matrix 會(huì)快速聚合嗎？
Corning Matrigel matrix 在 22℃至 35℃時(shí)會(huì)快速聚合成膠。

5..什么情況下，需要使用無(wú)酚紅 Corning Matrigel matrix？
對(duì)于涉及顏色檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)，推薦使用無(wú)酚紅 Corning Matrigel matrix，如使用熒光染料或 Drabkins 法計(jì)數(shù)內(nèi)皮細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn)。對(duì)于子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)，也需使用無(wú)酚紅 Corning Matrigel matrix。
此外，酚紅和非甾體雌激素結(jié)構(gòu)類似，有類雌激素效應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)可能具有干擾內(nèi)分泌和荷爾蒙代謝的能力。

6.如何從 Corning Matrigel matrix 中收獲細(xì)胞？
推薦使用 Corning Dispase 或 Corning Cell Recovery Solution 來(lái)收獲培養(yǎng)在Matrigel matrix 中的細(xì)胞。

Corning Dispase 相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細(xì)胞懸液，不會(huì)損傷細(xì)胞或細(xì)胞表面蛋白。對(duì)于需要繼續(xù)接種培養(yǎng)或進(jìn)行檢測(cè)的細(xì)胞，使用 Corning Dispase 不會(huì)產(chǎn)生損傷。此外，Corning Dispase 也可以用于組織分離。

對(duì)于代謝研究和 RNA 抽提，建議在 4℃使用 Corning Cell Recovery Solution 進(jìn)行非酶反應(yīng)的細(xì)胞收獲。因?yàn)?Corning Matrigel matrix 中含有痕量的 RNA，進(jìn)行RNA 分析時(shí)，應(yīng)設(shè)一個(gè) Corning Matrigel matrix（不接種細(xì)胞）的對(duì)照組。

7.其它從 Corning Matrigel matrix 中收獲細(xì)胞的方法：
降低溫度至 4℃ - 6℃使 Matrigel matrix 解聚，需要一定的時(shí)間并且僅適合一部分應(yīng)用。
離心以破壞 Corning Matrigel matrix 結(jié)構(gòu)。