在使用ProteanFect CRISPRMax Ultra轉(zhuǎn)染試劑盒時(shí),如何提升原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率?轉(zhuǎn)染后細(xì)胞沉淀不明顯怎么辦?本文匯總高頻問題,助您快速優(yōu)化實(shí)驗(yàn)!
Q1:轉(zhuǎn)染效率低如何解決?
A:建議延長(zhǎng)孵育時(shí)間(原代細(xì)胞≤30分鐘)或增加1.5-2.5倍轉(zhuǎn)染體系。同時(shí),確保細(xì)胞活性>90%并優(yōu)化RNP摩爾比(Cas9:sgRNA=1:1-1:2.5)。
Q2:小體積轉(zhuǎn)染后看不到細(xì)胞沉淀?
A:此為正?,F(xiàn)象,細(xì)胞可能附著于管壁。移液時(shí)避免觸碰管底,減少細(xì)胞損失。
Q3:能否同時(shí)轉(zhuǎn)染多個(gè)sgRNA?
A:可以!96孔板體系中,sgRNA總量需≥10 pmol(濃度≥1 μg/μL),確保高效編輯。
Q4:貼壁細(xì)胞如何操作?
A:可選擇消化為懸液轉(zhuǎn)染(如表2),或提前種板后直接添加轉(zhuǎn)染混合液。
更多技巧(如原代細(xì)胞活化、EGFP對(duì)照使用)可參考說明書或聯(lián)系華雅思創(chuàng)生物:15021010459。
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