測序的第一步是通過DNA或RNA構(gòu)建文庫。如圖1所示，文庫中包含DNA插入片段（DNA Insert），兩端各有一個接頭。

圖1：雙index文庫片段示意圖

接頭包含：

• P5和P7序列：允許文庫結(jié)合且能在flow cell上生成簇的序列

• Rd1 SP和Rd2 SP：啟動測序的測序引物結(jié)合位點

• Index 1和Index 2：用于樣本區(qū)分的index序列，可允許單次測序或單個Flow Cell通道中混合多個樣本

Illumina提供多種接頭試劑盒來實現(xiàn)更靈活和多樣性的index策略，Illumina接頭試劑盒之間的差異主要基于支持的樣本數(shù)量，index的長度和序列，和連接到插入片段的化學(xué)方法的不同。

以下表格列出了Illumina接頭試劑盒的產(chǎn)品規(guī)格：

• 復(fù)雜性指每個試劑盒中index序列種類的數(shù)量

• Index長度指分別讀取index 1和index 2所需的測序循環(huán)數(shù)量