近年來(lái),隨著測(cè)序技術(shù)的高速發(fā)展以及國(guó)家一系列利好政策的推動(dòng),以血漿中的游離DNA(cell free DNA,cfDNA)為研究對(duì)象的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷和腫瘤液體活檢產(chǎn)業(yè)蓬勃發(fā)展。由于血漿內(nèi)胎兒DNA和循環(huán)腫瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)含量較低,低頻突變或超低頻突變的檢測(cè)仍困難重重。
在母親血漿中,單胎妊娠早期的胎兒釋放的游離cfDNA濃度小于10%(1)。隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng),白細(xì)胞降解及隨之而來(lái)的母體基因組DNA(gDNA)的釋放將嚴(yán)重影響低含量的胎兒DNA的比例及完整性。對(duì)于循環(huán)腫瘤DNA而言,這一問(wèn)題更為突出。在癌癥早期,突變等位基因的頻率(mutant allele frequencies,MAFs)可能低至1/10,000(2)。cfDNA樣本本身在保存過(guò)程中如果被“背景”gDNA干擾,會(huì)造成檢測(cè)靈敏度的大幅度降低以及大量數(shù)據(jù)的浪費(fèi)。因此如何穩(wěn)定血漿中的白細(xì)胞,降低其在保存過(guò)程中因降解而釋放大量gDNA造成的“污染”,是液體活檢的重要一環(huán)。
對(duì)于cfDNA的保存,利用超高速離心分離血漿是最直接有效的避免白細(xì)胞gDNA干擾的方法。但是實(shí)際樣品采集中,往往不具備高速離心和冷凍保存的條件。游離核酸采血管便在這種情況下應(yīng)運(yùn)而生。這些保存管的目的就是盡可能長(zhǎng)時(shí)間的在常溫狀態(tài)下保存血漿中的游離核酸。目前商業(yè)化的游離核酸采血管,有些利用甲醛等交聯(lián)劑穩(wěn)定白細(xì)胞減緩背景gDNA的釋放。但是這些交聯(lián)劑會(huì)損傷cfDNA,并且會(huì)降低測(cè)序檢出率。
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