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「當您做單細胞全基因組研究時」 獲得高覆蓋度高保真性的全基因組擴增產(chǎn)物是準確全面的測序結果的保障。為了保證基因組高覆蓋度無偏好性的擴增，在單細胞測序技術誕生的近二十年時間里，全基因組擴增技術經(jīng)歷了幾次重大的變革，WGA主要有三種方式：DOP-PCR，MDA，MALBAC。 DOP-PCR： 技術原理：簡并寡核苷酸引物PCR，引物的3' 含6bp的隨機序列，可以隨機的和基因組DNA結合，從而實現(xiàn)對全基因組的擴增。 應用范圍：因為PCR的指數(shù)擴增特性，放大了基因組上不同序列之間的差異，因而導致擴增出的基因組覆蓋度較低。盡管如此，在1M bin
size的水平上，DOP-PCR適合對染色體的CNV進行定量。 MDA： 技術原理：2001年由Laskin團隊發(fā)明，使用隨機的六聚體引物和φ29DNA聚合酶進行反應，該聚合酶具有很強的鏈置換特性，能夠在等溫的條件下，擴增產(chǎn)生50~100kb的DNA片段。同時由于其3’-5’核酸外切酶活性和校對活性，φ29
DNA聚合酶具有很高的復制保真性[2]。 MALBAC： 技術原理：2012年由謝曉亮團隊發(fā)明，擬線性的擴增過程降低了指數(shù)擴增的序列偏好性。擴增引物的5’含有27bp的共同序列，3’是8bp的隨機序列，可以和模板在15~20℃的低溫下結合，經(jīng)過8~12個循環(huán)的擬線性擴增后，再對這些環(huán)狀的擴增子進行指數(shù)擴增[3]。
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| 單細胞全基因組擴增：PicoPLEX Single Cell WGA Kit v3 | |
| 對于單細胞全基因組的研究，僅含有皮克級DNA的單細胞來說，量少而難以直接進行文庫構建。因此需要先對單細胞中的DNA進行高質量的擴增。采用“隨機引物引發(fā)線性擴增”+“發(fā)夾結構”在2.5小時內(nèi)，僅需三步即可實現(xiàn)高再現(xiàn)性的全基因組擴增。作為PicoPLEX WGA Kit系列中的全新一代產(chǎn)品，PicoPLEX WGA Kit v3進一步優(yōu)化了DNA聚合酶、擴增引物、操作流程，擁有更好的CNV檢測分辨率，同時具備 高效的SNV檢測能力，滿足不同檢測需求。PicoPLEX WGA Kit系列產(chǎn)品在全球被IVF行業(yè)供應商信賴，并用于胚胎植入前遺傳學篩查和診斷（PGS/PGD）。 | |
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| 流程示意圖 | |
單細胞DNA文庫構建：PicoPLEX? Gold Single Cell DNA-Seq Kit（index 需單獨購買） | |
| 由于NGS技術的迅速發(fā)展，使得對單細胞全基因組研究更為廣泛和成熟。不過目前對于單細胞全基因組的文庫構建，更多的方法是先進行單細胞全基因組擴增，再進行DNA文庫構建兩步走的方式，整個操作復雜，稍有不慎就很可能需要重頭再來，讓人頭痛不已。，這款試劑盒將單細胞全基因組擴增和DNA文庫構建兩步整合在一起，只需四步三小時，便可完成單細胞到全基因組測序文庫的華麗變身！ |
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