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產(chǎn)品名稱：Pharmingen Transcription Factor Buffer Set

產(chǎn)品貨號：562574

產(chǎn)品說明：

應(yīng)用: 細(xì)胞內(nèi)染色（流式細(xì)胞儀）（常規(guī)測試）

產(chǎn)品描述

BD Pharmingen™轉(zhuǎn)錄因子緩沖液套裝優(yōu)化用于在免疫熒光染色和表達(dá)特定胞質(zhì)內(nèi)和核內(nèi)蛋白的細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析之前固定和透化細(xì)胞。BD Pharmingen™轉(zhuǎn)錄因子緩沖液組旨在提高易用性和小化處理時間，減少非特異性染色，提高陽性染色細(xì)胞的分辨率，并顯著減少固定，透化和染色過程中的細(xì)胞損失。使用BD Pharmingen TM轉(zhuǎn)錄因子緩沖液組改善了已知在各種細(xì)胞內(nèi)區(qū)室內(nèi)表達(dá)的許多蛋白質(zhì)，尤其是轉(zhuǎn)錄因子的流式細(xì)胞術(shù)檢測。已發(fā)現(xiàn)該緩沖系統(tǒng)可用于固定和透化來自不同人和小鼠組織的各種細(xì)胞類型。緩沖系統(tǒng)可靈活地支持多孔板高通量和大量樣品分析以及需要隔夜樣品存儲的應(yīng)用。緩沖系統(tǒng)對加工細(xì)胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導(dǎo)致與新鮮制備的，高度存活的原代細(xì)胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細(xì)胞固定和透化之前和之后都與細(xì)胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)可靈活地支持多孔板高通量和大量樣品分析以及需要隔夜樣品存儲的應(yīng)用。緩沖系統(tǒng)對加工細(xì)胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導(dǎo)致與新鮮制備的，高度存活的原代細(xì)胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細(xì)胞固定和透化之前和之后都與細(xì)胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)可靈活地支持多孔板高通量和大量樣品分析以及需要隔夜樣品存儲的應(yīng)用。緩沖系統(tǒng)對加工細(xì)胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導(dǎo)致與新鮮制備的，高度存活的原代細(xì)胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細(xì)胞固定和透化之前和之后都與細(xì)胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)對加工細(xì)胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導(dǎo)致與新鮮制備的，高度存活的原代細(xì)胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細(xì)胞固定和透化之前和之后都與細(xì)胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)對加工細(xì)胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導(dǎo)致與新鮮制備的，高度存活的原代細(xì)胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細(xì)胞固定和透化之前和之后都與細(xì)胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。

產(chǎn)品介紹：

細(xì)胞內(nèi)染色方案

1.固定：細(xì)胞表面染色程序完成后，吸出殘留的染色緩沖液并通過短暫渦旋松開細(xì)胞沉淀。向每個管中加入1mL新鮮制備的1x Fix / Perm緩沖液工作溶液，并通過渦旋振蕩約3秒重懸細(xì)胞沉淀。將樣品在2-8°C孵育40-50分鐘，避光。

2洗滌：將1ml 1x Perm /洗滌緩沖液直接加入懸浮在1x Fix / Perm緩沖液中的固定和透化細(xì)胞中。離心沉淀細(xì)胞。（注意：Fix / Perm后的所有離心步驟均為350 g ，在2-8°C下進(jìn)行6分鐘）。傾倒或吸出上清液。

3.洗滌：向沉淀的細(xì)胞中加入2ml 1x Perm /洗滌緩沖液，然后離心。傾析或吸出洗滌緩沖液。

4.細(xì)胞內(nèi)染色：向細(xì)胞樣品中加入80-100μl的1x Perm / Wash Buffer和對細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)特異的熒光抗體（如FoxP3，T-bet和/或IL-17A）和非特異性對照染色（例如，匹配熒光Ig同種型對照）到每個管。渦旋管或支架10秒鐘，在2-8°C溫育40-50分鐘，避光。

5洗滌：在洗滌之前簡單地渦旋樣品。用2ml 1x Perm /洗滌緩沖液洗滌細(xì)胞。離心細(xì)胞。傾倒或吸出洗滌緩沖液。

6.洗滌：用2ml 1x Perm / Wash洗滌細(xì)胞。離心細(xì)胞。傾析或吸出洗滌緩沖液。

7.用于流式細(xì)胞術(shù)的樣品制備：將細(xì)胞沉淀重懸于350μl流式細(xì)胞術(shù)染色緩沖液中。使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞并獲取數(shù)據(jù)。