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RNAscope 2.5高敏感性試劑盒（紅色）是基于ACD專利的信號放大和背景抑制技術(shù)的RNA原位雜交試劑盒，能夠靈敏地將固定于載玻片上的樣本中每個細(xì)胞中的單個RNA分子可視化。RNAscope 原位雜交不需要傳統(tǒng) ISH 所必須的無RNA 環(huán)境。該試劑盒是目前市面上靈敏度最佳的試劑盒，能夠用于表達(dá)水平低的RNA的檢測。
使用經(jīng)適當(dāng)制備的組織樣品，首先預(yù)處理切片，然后使用RNA特異性探針與靶標(biāo)RNA雜交。通過多步過程放大信號，然后將樣品與辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的探針雜交，最后采用發(fā)色底物檢測。每個單個RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物都會形成明顯的發(fā)色團(tuán)沉淀物點，可在普通亮視野顯微鏡下放大40-100倍進(jìn)行觀察。由于具有額外的放大步驟，在RNAscope® 2.5 分析中，放大 10-20 倍也可觀察結(jié)果。RNAscope® 2.5分析提供兩種可選的檢測試劑盒：棕色（DAB）和紅色（Fast Red），經(jīng)它們可視化處理后的 RNA 分子分別為棕色或紅色發(fā)色點。

試劑盒特點：
靈敏度高：能夠做到單分子水平檢測，能夠檢測低豐度表達(dá)RNA（1-20拷貝/細(xì)胞）；
-  樣本適用類型：該試劑盒能夠用于石蠟切片、冰凍切片、細(xì)胞爬片和外周血單個核細(xì)胞等樣本；
- 結(jié)果易于觀察：RNAscope 2.5高敏感性試劑盒（紅色）通過使用Fast Red進(jìn)行顯色，使顯色結(jié)果與背景有較高的對比度，有利于信號的識別。在肺、肝、視網(wǎng)膜和皮膚等組織標(biāo)本中，往往由于色素沉著造成 DAB 顯色染色與色素沉著物區(qū)分困難。ACD推薦RNAscope 2.5 HD紅色試劑盒 進(jìn)行顯色。RNAscope 2.5 HD紅色試劑盒使用Fast Red進(jìn)行顯色，使顯色結(jié)果與背景有更高的對比度，而且對比蘇木精染色，紅色更突出，在標(biāo)準(zhǔn)明場顯微鏡下更容易識別，因此ACD也建議使用此法檢測表達(dá)水平更的基因。
- 明場、熒光均可見：顯色結(jié)果在標(biāo)準(zhǔn)明場顯微鏡下即可觀察。也可在550nm激發(fā)，在熒光顯微鏡下可觀察。