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從開始到結束：人iPS細胞基因編輯和單細胞克隆系統(tǒng)

人誘導多能干細胞（Human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)是一個功能強大的研究工具和疾病模型，因為其具備增殖、自我更新、分化為多種細胞類型的能力。此外，人iPS細胞還可以再現(xiàn)細胞來源個體的疾病表型和基因型。將人iPS細胞結合基于CRISPR/Cas9的基因編輯技術，可以在同基因的細胞系中研究特定基因改變引起的功能影響，因為基因編輯過的人iPS細胞能提供可再生的、無遺傳變異的患病細胞和健康細胞資源。

CRISPR/Cas9系統(tǒng)已經成為一個強大的基因編輯工具，因為其高的靶向特異性，編輯效率和易用性。該技術的強大主要源于它的簡單，因為全部只需要一個Cas9核酸酶結合一個單鏈向導RNA（single guide RNA，sgRNA) 就可以決定靶向特異性（Jinek et al. 2012)。這種RNA編程的（RNA-programmable）方法利用了非同源末端連接(non-homologous end joining，NHEJ) DNA修復途徑的易錯特性，進而產生基因敲除(通過插入/刪除)。這種方法也可以通過同源重組（homology-directed repair，HDR)途徑被用于基因敲入。

CRISPR/Cas9系統(tǒng)的組件可以通過多種方法成功導入至靶細胞，包括基于載體的表達系統(tǒng)，RNA轉染, 導入Cas9/sgRNA核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP)復合物(Sander and Joung 2014)等。與基于載體的方法相比，直接導入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種快速轉入基因編輯實驗的方法，同時脫靶效應的可能性更?。↘im et al. 2014)。

一旦Cas9/sgRNA RNP復合物被導入，為了分離和篩選感興趣的基因型，單細胞必須被分離并擴增為克隆細胞系。傳統(tǒng)上,從基因編輯的hiPS細胞建立一個克隆群是低效的、具有挑戰(zhàn)性的和耗時的，因為hiPS 細胞是以集落生長和傳代的。通常，這會導致細胞死亡和提前分化。然而，Cellartis單細胞克隆系統(tǒng)包含一個成分確定的培養(yǎng)系統(tǒng)(由基礎培養(yǎng)基，包被劑，和添加劑組成)，用于有效形成單細胞克隆和擴增基因編輯后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一個基于單層培養(yǎng)的系統(tǒng)，規(guī)避了集落狀培養(yǎng)帶來的挑戰(zhàn)，允許單細胞傳代和促進接種的單細胞存活和后續(xù)擴增。

Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個完整的，在無飼養(yǎng)層和成分確定條件下，用于hiPSCs有效擴增和擴大生產的系統(tǒng)。試劑盒包含了從接種單細胞至96孔板到擴增至48孔板過程中所有必要的試劑。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

產品特點：

1.成分確定的，無血清，無飼養(yǎng)層培養(yǎng)

2.All-In-One型: 培養(yǎng)基+添加劑+包被劑維持良好的多能性狀態(tài)，背景分化低

3.細胞非集落狀均勻生長，輕松單細胞傳代

4.單個干細胞基因操作實驗的理想選擇

產品名稱：人 iPS細胞基因編輯和單細胞克隆系統(tǒng)

產品貨號：CellArtis Y30021

產品品牌：TAKARA/ CellArtis

英文名稱：Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit

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CellArtis           Y40002            NDiff® 227

CellArtis           Y40000            RHB-Basal®

CellArtis           Y40001            RHB-A®

CellArtis           Y30010            Cellartis® DEF-CS™ 500 Culture System

CellArtis           Y30021            Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit

CellArtis           Y30045            Cellartis® DEF-CS™ 500 Xeno-Free Culture Medium w/o Antibiotics

CellArtis           Y30047            Cellartis® DEF-CS™ 500 Xeno-Free 3D Spheroid Culture Medium w/o antibiotics

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