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| 產(chǎn)地 | |
| 品牌 | Yeasen |
| 貨號 | 40301ES50 |
| 用途 | 細胞周期與細胞凋亡檢測 |
| 包裝規(guī)格 | 50Tests/盒 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 別名 | 細胞凋亡檢測試劑盒 |
| 是否進口 | 是 |
產(chǎn)品名稱：Yeasen 40301ES50 細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒 現(xiàn)貨
產(chǎn)品貨號：40301ES50
產(chǎn)品品牌：Yeasen
產(chǎn)品規(guī)格：50Tests/盒
產(chǎn)品用途：細胞周期與細胞凋亡檢測
英文名稱：Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit
產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
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Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒 |
40301ES50 |
50 T |
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40301ES60 |
100 T |
產(chǎn)品描述
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒采用了經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidium staining,即PI staining)方法對細胞周期與細胞凋亡進行分析。
碘化丙啶 是一種雙鏈DNA熒光染料,其嵌入雙鏈DNA后可以產(chǎn)生熒光,并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內(nèi)的DNA被PI染色后,可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定,根據(jù)DNA含量的分布情況,進行細胞周期和細胞凋亡分析。
PI染色后,假設(shè)G0/G1期細胞的熒光強度為1,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2,正在進行DNA復(fù)制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA pian段化導(dǎo)致部分基因組DNApian斷在染色過程中丟失,因此凋亡細胞PI染色后呈現(xiàn)明顯的弱染,即熒光強度小于1,在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰,即凋亡細胞峰。
細胞凋亡也可以用流式細胞儀觀察細胞光散射的變化來檢測。 細胞發(fā)生凋亡時,由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂,產(chǎn)生凋亡小體,使細胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。凋亡前期,染色質(zhì)皺縮,細胞密度增加,前向角光散射色顯著降低。凋亡后期,細胞產(chǎn)生凋亡小體,前向角光散射和側(cè)向角光散色都顯著降低。
本試劑盒通常應(yīng)用于貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測,則必須把組織消化成單細胞狀態(tài),才可以進行檢測。
運輸與保存方法
運輸:冰袋運輸。
保存方法:-20℃避光保存,有效期為2年。
【注】如果需要在短時間內(nèi)多次重復(fù)使用,可以于4℃避光保存,2個月內(nèi)有效。
注意事項
1)本試劑盒需要使用流式細胞儀進行檢測。
2)細胞處理需輕柔,盡量避免人為的損傷細胞。
3)為防止不同批次細胞在實驗時所處周期不同導(dǎo)致重復(fù)性差,可以在實驗前進行細胞的同步化處理。實驗細胞應(yīng)處于對數(shù)
生長期,貼壁細胞一般在50~80%匯合度時收集為宜。
4)400目篩網(wǎng)過濾是用來將粘在一起的細胞團濾掉,留下單細胞,否則會出現(xiàn)人為的多倍體干擾。如果沒有條件過濾,請在染色前將細胞輕彈以分散,再進行染色。
5)熒光染料均存在淬滅問題,保存和使用過程中請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
6)操作碘化丙啶時,應(yīng)注意防護,、避免吸入。
7)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1)細胞樣品制備:細胞數(shù)量控制在1×105~1 × 106個。
a)貼壁細胞:小心吸除細胞培養(yǎng)液,用胰酶消化細胞,制備成單細胞懸液。1000 g離心5 min,沉淀細胞,棄上清,用1 mL預(yù)冷的PBS潤洗細胞一次,離心收集細胞。
b)懸浮細胞:1000 g離心5 min,沉淀細胞,小心吸除上清。加入1 mL預(yù)冷的PBS,重懸細胞,再次離心收集細胞。
c)組織細胞:將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后,用0.25%的胰酶消化0.5-1 h,經(jīng)過200-400目篩網(wǎng)過濾得到單細胞懸液。1000 g離心5 min,沉淀細胞。加入約1 mL預(yù)冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞。
2)細胞固定:細胞沉淀用1 mL預(yù)冷的70%乙醇輕輕混勻,4℃固定2 h以上或者過夜。接下來1000 g,離心5 min沉淀細胞后,用1 mL預(yù)冷的PBS重懸。然后再次1000 g離心5 min沉淀細胞。
3)染色:在0.5 mL染色緩沖液(40301-C)中加入10 μL 碘化丙啶儲液(40301-B)和10 μLRNase A(40301-A)溶液,混勻待用。每個細胞樣品加入0.5 mL配置好的碘化丙啶染色 液,輕輕混勻重懸細胞。37℃避光孵育30min,就可以進行流式檢測,流式檢測*在5h內(nèi)完成。
【注】:配置好的PI染色液在短時間內(nèi)可以4℃保存,宜當日使用。
4)流式檢測和分析:細胞用400目篩網(wǎng)過濾,用流式細胞儀進行檢測,在激發(fā)波長488 nm波長處檢測,同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析
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